۱۰۰
۷۵
۵۰
۲۵
۰
غلظت (mg/L)
۰
۵/۲
۵
۵/۷
۱۰
متانول %۵۰ (ml)
۱۰
۵/۷
۵
۵/۲
۰
گالیک اسید
برای سنجش غلظتهای مختلف گالیک اسید، مطابق مراحل ذکر شده برای عصاره عمل شد. بلانک نیز به همین ترتیب با ۱۰۰ میکرولیتر متانول ۵۰% بهجای محلول گالیک اسید آماده شد. جذب غلظتهای مختلف گالیک اسید به ترتیب در طول موج ۷۶۵ نانومتر خوانده شد. منحنی استاندارد با در دست داشتن غلظتهای مختلف گالیک اسید و جذب هر کدام از غلظتها رسم و معادله منحنی استاندارد بهدست آمد. نتایج به صورت میلی گرم گالیک اسید به ازای یک گرم نمونه خشک محاسبه شد.
منحنی استاندار گالیک اسید (بر حسب میلی گرم بر لیتر)
۲-۱۴ اندازه گیری پتاسیم به روش نشر شعلهای (AES)
۲-۱۴-۱ تهیه عصاره گیاه به روش سوزاندن خشک و ترکیب باHCL
برای اندازه گیری پتاسیم موجود در بافت خشک گیاه، در ابتدا نیاز به تهیه عصاره از گیاه میباشد. به این منظور ۵/۰ گرم پودر نمونه خشک شده با دقت ۰۰۱/۰ گرم توزین و در کروزه چینی ریخته و در کوره با حرارت معمولی قرار داده شد. درجه حرارت کوره به تدریج و در عرض ۲ ساعت به ۵۵۰ درجه رسید. کروزهها بسته به نوع بافت (برگ و ساقه) به طور میانگین ۴ ساعت در این حرارت نگه داشته شدند. بعد از اتمام این مدت، کوره خاموش شد و کروزهها از کوره خارج گردید. بعد از خنک شدن، خاکسترها با کمی آب خیس و با شیشه ساعت پوشانده شدند. به آرامی ۱۰ میلیلیتر اسید هیدروکلریک ۲ مولار به هر یک از آنها اضافه گردید. بعد از اتمام فعل و انفعالات، محتویات کروزه از کاغذ صافی به داخل بالن ژوژه ۱۰۰ میلیلیتری صاف شد. کروزه و کاغذ صافی چندین بار با آب مقطر شسته و به حجم رسانیده شد. برای جلوگیری از تغییرات غلظت، عصاره در ظرفهای در بسته و در یخچال با دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری شد. عصارهی بهدست آمده برای سنجش عنصر پتاسیم استفاده گردید.
۲-۱۴-۲ تهیه محلول ها
تهیه استاندارد غلیظ پتاسیم به غلظت ۵۰۰۰ میلیگرم در لیتر:
۵۳۴/۹ گرم از پودر کلرید پتاسیم را در کمی آب مقطر حل کرده و در بالن ژوژهی ۱۰۰۰ میلیلیتری ریخته و به حجم رسانیده شد.
سری محلولهای استاندارد:
۰، ۲، ۴، ۶، ۸، ۱۰ میلیلیتر از استاندارد غلیظ را با پیپت برداشته و در بالن ژوژهی ۱۰۰ میلیلیتری ریخته و به حجم رسانیده شد.
۲-۱۴-۳ روش کار
سری محلولهای استاندارد و نمونه شاهد و عصارهی گیاه به نسبت ۹+۱ با آب مقطر رقیق گردید. سپس شدت نور امیشن حاصل از نمونههای عصاره، شاهد و سری محلولهای استاندارد با دستگاه فلیم امیشن (فلیم فتومتر) با بهره گرفتن از فیلتر پتاسیم و با بکارگیری گاز پروپان با هوا اندازه گیری شد. مقدار پتاسیم در ماده خشک گیاهی بر حسب گرم درصد از رابطه زیر محاسبه گردید.
(a+b)
a- غلظت پتاسیم در نمونه رقیق شده بر حسب میلیگرم در لیتر (ppm)
b- غلظت پتاسیم در شاهد بر حسب میلیگرم در لیتر (ppm)
v- حجم عصاره حاصل از عمل هضم بر حسب میلی لیتر
w- وزن نمونه ی گیاه بر حسب گرم
منحنی کالیبراسیون غلظت های استاندارد پتاسیم
۲-۱۵ تجزیه آماری
تجزیه آماری داده ها با بهره گرفتن از نرمافزار (۱۶٫۰) SPSSو برای مقایسه میانگین داده ها از آزمون Duncan استفاده شد. انحراف از میانگین داده ها بهوسیله خطای استاندارد نشان داده شد. جهت رسم نمودارها از نرم افزار Excel 2007 استفاده شده است.
فصل سوم
